9206 無菌檢查用隔離系統驗證和應用指導原則 （
9206 無菌檢查用隔離系統驗證和應用指導原則
本指導原則是為無菌檢查用隔離系統的驗證和應用提供指導。
無菌檢查用隔離系統是提供產品無菌檢查試驗用受控潔凈環境的一套集成 化系統，其性能特點主要體現在密閉系統的完整性，滅菌程序的有效性，無菌狀 態的維持能力等方面。
無菌檢查試驗應用隔離系統時，風險管理應貫穿無菌檢查用隔離系統的設 計、制造、安裝、調試、驗證、使用、維護和周期性回顧等工作流程中。
無菌檢查用隔離系統的結構
無菌檢查用隔離系統的內部艙體構成一個封閉的操作空間，與外界的空氣交 換均通過可截留微生物的高效空氣過濾系統進行；并能采用經驗證的方式對內部 表面進行滅菌處理；在滅菌完成后，通過輸入經過濾的潔凈空氣來維持內部的受 控環境；同時，所集成的監測設備還可對滅菌過程和受控環境進行監控。在試驗 過程中，封閉的隔離系統不直接與外界環境相連，可使用無菌接口、快速轉移通 道或者帶有滅菌功能的傳遞艙進行物料傳遞，物料經過表面滅菌處理后，通過無 菌傳遞進入操作艙體，傳遞過程中可保持內部空間和外部環境完全隔離，降低物 流引入污染的風險。隔離系統還從根本上避免了操作人員與試驗物品的直接接觸， 操作人員無需穿著專用潔凈服，而是通過艙體上的操作手套或半身操作服對艙內 物品、儀器進行操作。因此，使用隔離系統進行無菌檢查，可以避免實驗用物品 和輔助設備被污染，提高了無菌檢查結果的準確性。
艙體
隔離系統的艙體按制造材質，可分為硬艙隔離系統和軟艙隔離系統，硬艙隔 離系統的艙體一般由不銹鋼、玻璃或硬質塑料等制成，軟艙隔離系統的艙體一般 由軟質塑料制成。
手套-袖套組件或半身操作服為安裝在艙體上的部件，用于實現艙內的試驗 操作，半身服覆蓋操作人員的軀干，并配有透明頭盔和通風裝置。
空氣處理系統 無菌檢查用隔離系統應配備可截留微生物的高效空氣過濾系統（或更高級別 的過濾系統）。隔離系統按內部氣流組織區分，可分為單向流隔離系統和非單向流隔離系統。靜態時內部環境的潔凈度應達到 A 級空氣潔凈度要求。無菌檢查 用隔離系統一般在正壓下操作，內部應通過持續送風保持足夠的正壓來維持內部 的無菌環境。
傳遞裝置
滅菌后的培養基、稀釋液和實驗用品可以通過有滅菌功能的傳遞艙直接無菌 傳遞到操作艙內。此外，不同的隔離系統艙體也可以通過專門設計的快速傳遞門 （RTP）連接，以實現將實驗物品在兩個或多個艙體之間進行無菌傳遞。RTP 上 未經滅菌的表面通過互鎖環或法蘭互相疊合，并通過密封圈封閉，從而防止微生 物進入隔離系統內。
滅菌設備
隔離系統一般采用汽化的滅菌劑對內部環境進行表面滅菌，目前較常用的滅 菌劑包括汽化過氧化氫、過氧乙酸等。滅菌蒸汽發生器可集成于隔離系統中，也 可獨立于隔離系統，與隔離系統之間的氣體管路連接，應確保其密封性。滅菌劑 應通過高效空氣過濾器進入隔離系統內，滅菌結束后須對滅菌劑進行排空。
配套設備與輔助設施
監測設備
隔離系統應配置對內部潔凈環境和系統運行狀況進行監測、報警 及記錄的設備。監測設備應確保數據得到客觀真實的記錄，數據記錄的可靠性應 符合國家有關規定。
無菌檢查設備和工具
隔離系統內部安裝無菌檢查使用的配套設備和輔助 設施，如無菌檢查過程中使用的蠕動泵、真空泵、物料裝載支架，廢棄物通道等。
隔離系統安裝位置的選擇
無菌檢查用隔離系統建議安裝在 D 級潔凈度區域；如安裝在受控非潔凈區 域，應進行充分的風險評估。安裝房間應限制無關人員出入，安裝地點應有足夠 的建筑承重，周圍有足夠的空間，以便于隔離系統的移動、物品的運輸和正常維 護。
用戶應充分考慮隔離系統與安裝環境之間的相互影響、及人員的安全性和舒 適性，在設計中應采取措施降低運行風險。隔離系統應避免安裝在房間通風口直 吹的地方，否則可能導致隔離系統艙體部分區域被冷卻，從而造成滅菌過程中滅 菌氣體在艙體內壁局部過度冷凝。對于某些滅菌技術，溫濕度的控制是至關重要的。當采用對溫度敏感的滅菌方法時，隔離系統房間的溫度應當是均一的。此外， 滅菌劑排放的安全風險也應考慮。
隔離系統的驗證
隔離系統的首次驗證通常包括設計確認，安裝確認，運行確認和性能確認等 環節，驗證計劃的范圍與程度應當基于科學的風險評估。
隔離系統在用于無菌檢查前，其性能應得到全面確認且具有書面記錄。若隔 離系統配置了物料進出的傳遞艙或快速傳遞門接口，亦需驗證。
設計確認
在設計確認中，應關注隔離系統的關鍵性能，確認其滿足法規的一般性要求 并考慮用戶的使用特點，例如：根據使用目的，確定隔離系統的總體布局、工作 流程、主要功能實現方式；評估材質和結構設計與滅菌過程的兼容性，防范滅菌 不徹底及滅菌劑腐蝕的風險；評估無菌環境的維持能力，防范內部設備運行和試 驗活動帶來的不利影響，防范外界污染侵入的風險；評估報警功能設計的合理性， 監測設備和記錄功能的可靠性；評估環境和人員的安全要求等方面。
安裝確認
安裝確認是對隔離系統進行現場檢查，確認設備及其配套部件的供應與合同 一致，制造符合設計要求，并已按照要求進行正確安裝。在安裝確認中，對于因 設備配置缺失、選材錯誤、安裝不當等造成的風險應重點關注。
運行確認
運行確認一般包括以下內容：
（1）操作性能
證明所有報警功能均能按照設定的要求正常工作、及隔離系統可按設定參數 值運行。計算機化控制的隔離系統還應關注用戶權限測試和數據記錄功能測試。
（2）隔離系統完整性
隔離系統在正常運行條件下應能保持良好的完整性。完整性測試通常包括： 已安裝高效空氣過濾器泄漏測試、艙體完整性、及手套和半身服的完整性。 高效
空氣過濾器需確認其安裝正確，過濾器及安裝框架無缺陷和滲漏，應至 少對安裝于艙體的末端過濾器進行檢漏，包括單向流系統的循環高效過濾器和非 單向流系統的進風高效過濾器；測試方法可參考《潔凈室及相關受控環境第 3部分：檢測方法》的現行國家標準中附錄 B6 已裝過濾系統檢漏進行。此外，非 單向流系統還需評估艙體排風高效過濾器的泄漏風險。
艙體完整性可通過壓力泄漏測試（例如壓力變化法或恒壓法）驗證設備是否 達到設計要求。測試期間應維持背景環境的穩定，避免溫度和壓差的劇烈變化， 建議測試起始壓力不低于最高工作壓力的 2 倍。
手套和半身服完整性泄漏測試，在目視檢查的基礎上，手套采用手套檢漏儀 進行物理檢測，測試方法可參考《潔凈室及相關受控環境第 7 部分：隔離裝置》 的現行國家標準附錄 E5；半身服可采用充入示蹤氣體（例如氨氣）的化學方法 或其他適宜的方法進行檢測。
（3）壓差
應驗證隔離系統在靜態和動態條件下維持艙體正壓差的能力。靜態條件下壓 差范圍通常為 20～50Pa，最高不超過 100Pa。動態條件下，可由實驗人員在進行 模擬無菌檢查和空氣采樣操作的同時記錄艙體壓差，正常操作時應始終維持正壓。
（4）氣流
氣流測試包括風速及換氣次數測試，氣流流型測試。
應確認設備在無菌檢查狀態下的風速和換氣次數。單向流隔離系統應進行風 速及均勻性確認，測試方法可參考《潔凈室及相關受控環境第 3 部分：檢測方法》 的現行國家標準中附錄 B4 進行。單向流系統平均風速一般應符合（通則 9205） 中 A 級區的標準，非單向流系統換氣次數應進行風險評估，保證充分的自凈能 力。
氣流流型測試可參照《潔凈室及相關受控環境第 3 部分：檢測方法》的現行 國家標準中附錄 B7 氣流方向檢測和顯形檢查進行，采用去離子水霧發生器或者 煙霧筆發煙，確認艙體內部的氣流流型，應當能夠證明所用氣流方式不會導致污 染風險。
（5）滅菌循環確認
該過程的目的在于確認所執行的滅菌程序各步驟正常，運行值和設定值相符。 應針對制造商的操作要求選擇適宜的滅菌方法，并確定該方法的操作步驟。 滅菌劑分布的合理性可通過足夠數量的化學指示劑或生物指示劑布點的方 式確認。應在滿載條件下確認滅菌劑的分布，物料和試驗工具滿載的模式圖應當記錄確定。
在滅菌完成后，應通入潔凈氣流將滅菌劑排出，在排出過程中可以采用催化 分解裝置，應注意評估滅菌劑排出過程的安全性。
性能確認
隔離系統性能確認一般包含以下內容：
（1）滅菌效果確認 隔離系統艙體內表面、內部的設備及進入艙體的各種物料都應經過處理以降 低微生物負載。用于隔離系統、試驗物品的滅菌方法應能達到或超過使生物指示 劑下降 6 個對數值的效果。可使用某種合適的、高抗性的生物指示劑來驗證。使 用充分數量的生物指示劑進行試驗可以從統計學上證明滅菌效果是可以再現以 及滅菌劑的分布是否合適。尤其要注意那些滅菌劑濃度較低的地方。隔離系統內 物品和設備滿載時需要用更多的生物指示劑進行試驗。滅菌程序的確定要經過三 次連續的驗證且能使生物指示劑下降達到或超過 6 個對數值。
應根據工作流程設計和無菌維持情況，確定隔離系統再滅菌的頻率（參照隔 離系統內部環境的無菌維持）。
（2）滅菌劑殘留確認
用戶應評估滅菌劑殘留可能導致的假陰性風險。在滅菌完成后，應通過能有 效測定殘留的低濃度量程檢測器（或測試管）監測艙內滅菌劑的濃度，保證在無 菌檢查開始后，艙內的滅菌劑殘留量不得影響無菌檢查的結果。
環境中滅菌劑濃度應符合《工作場所有害因素職業接觸限制第 1 部分：化學 有害因素》現行國家標準的規定。
（3）隔離系統內部潔凈度確認
隔離系統艙體內部的潔凈環境應進行確認，其懸浮粒子（靜態），沉降菌， 浮游菌和表面微生物按照藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則（通則 9205）測定，應符合 A 級空氣潔凈度的要求。
離線滅菌的 RTP 傳遞容器，應當根據離線滅菌方式（如濕熱滅菌，輻照滅 菌等）進行滅菌效果確認，如為商品化的一次性產品，用戶應要求制造商提供滅 菌驗證的證明，并在 RTP 傳遞容器與隔離系統對接后，對 RTP 接口兩側的滅菌 面，以及容器內部進行表面微生物采樣。
隔離系統的再驗證
為保障隔離系統在生命周期內的穩定運行，維持有效的驗證狀態，用戶還應 根據風險評估情況制定隔離系統的再驗證計劃。
重要儀器儀表，例如壓差儀表，溫濕度儀表，風速儀表、流量儀表、粒子計 數器、滅菌劑濃度傳感器、稱量天平等應定期進行校驗。
隔離系統的再驗證一般包括年度驗證和期間核查，用戶應按照文件化的程序 及規定的可接受標準實施再驗證。再驗證計劃應圍繞密閉系統的完整性，滅菌程 序的有效性，無菌狀態的維持能力等關鍵性能進行評估。再驗證的結果應形成記 錄并保存。
此外，用戶在設備使用中，出現運行程序或參數變更、維護時更換重要配件、 發生運行異常并完成維修后、安裝場地變更以及長時間停用后的再啟用等情況時， 也應進行相應的再驗證。
隔離系統的應用
用戶完成隔離系統驗證后，若將其用于無菌檢查，應根據設備和自身無菌檢 查工作特點，確定相關的應用規范。
包裝完整性驗證
隔離系統常用的汽化滅菌劑在滅菌循環過程中不會穿透螺旋蓋試管和玻璃 瓶、壓塞玻璃瓶、西林瓶、安瓿等密封完好的容器，然而，滅菌劑對某些包裝物 會產生不利影響，可能抑制微生物生長。為避免假陰性風險，可采取適當措施， 如選用能夠耐受滅菌劑滲透的包裝材料或其它適宜的方法，以減少滅菌劑浸入包 裝和容器內，但所采取的措施應避免造成滅菌不徹底。在某些程度上，也可通過 降低滅菌劑的濃度及縮短滅菌周期，來降低滅菌劑的滲透風險，但相應的滅菌循 環應進行充分驗證。
在試驗物品放入艙體之前，有時也會使用滅菌劑對物品包裝表面進行預處理， 以減少微生物負荷。無論是預處理還是滅菌循環過程，應通過驗證試驗證明暴露 于這些過程中的供試品、無菌檢查使用器材、稀釋劑和培養基，不會由于滅菌劑 的滲透而影響供試品中低水平微生物污染的檢出。建議用化學和微生物挑戰試驗 測試包裝物對滅菌劑滲透的抵抗能力，微生物試驗時應使用至少經過一輪完整滅 菌循環處理后的物品，驗證其能符合相應微生物種類的回收試驗的要求。
對于無法通過包裝完整性驗證的供試品，用戶應考慮其在隔離系統中操作的 風險。
隔離系統內部環境的無菌維持
隔離系統內部環境在操作周期內的無菌維持能力可通過執行微生物監測程 序進行驗證。在進行連續多天的無菌維持時，帶傳遞艙的系統可每天進行采樣， 不帶傳遞艙的系統可在滅菌后的第一天和無菌維持期的最后一天進行采樣，并對 采樣進行培養。通過周期性的采樣分析，實現對艙內無菌維持情況的驗證。因隔 離系統出現故障或者偶然因素引起的微生物污染必須進行調查。
除浮游菌和沉降菌外，隔離系統內部表面可采用平面接觸碟、不規則的表面 可采用拭子搽拭采樣進行微生物監控。由于培養基殘留會使隔離系統產生染菌風 險，因此，最好在檢驗完成后進行表面微生物監測，如果在檢驗過程中進行采樣， 需及時清理培養基殘留。
檢驗用具和供試品進入艙內的過程最可能造成微生物的污染，所以應確保進 入隔離系統物品及傳遞過程的無菌性。
手套和半身衣是另一個微生物污染源，尤其是用于處理無菌檢驗物品的手套， 應當特別關注。試驗用手套應保證其完整性，選擇手套時應考慮其穿刺抗性和耐 磨性，并有良好的觸感。
艙體內部進行連續的懸浮粒子檢測，可快速檢測到過濾器的泄漏，也可使用 便攜式的懸浮粒子檢測器進行周期性檢測，懸浮粒子和微生物采樣不能對艙體內 部的無菌環境產生影響。
日常使用規范
為保障設備性能處于受控狀態，用戶應制定日常使用規范，一般包括以下幾 個方面：
（1）完整性檢測
在每次無菌檢查開始前及結束后，建議對艙體和手套/袖套的完整性進行檢 測，檢測頻率也可根據風險評估確定。
手套完整性檢測按運行確認中的隔離系統完整性項下方法進行，也可采用其 他方法如微生物法作為補充，檢測時將手套浸入適宜培養基或沖洗液中，然后將 浸泡液直接培養或采用薄膜過濾處理后取濾膜培養，根據是否生長微生物判定手套的完整性，本法可以檢測出其他方法檢測不出的泄漏。
（2）監測和記錄
每次試驗時，為確保設備按經驗證的設定參數運行，應對設備運行狀態和內 部環境指標進行監測和記錄。
（3）日常清潔
無菌檢查用隔離系統每次試驗前后應進行清潔，對內部和物品包裝表面的清 潔程度以達到肉眼可見的干凈干燥為宜。
滅菌程序開始前，對表面的預清潔有利于降低微生物負荷，保障滅菌效果。 試驗后，應注意被檢樣品殘留的清潔，特別是抗生素類產品，以避免影響后續被 檢樣品中污染微生物的檢出。選用的清潔劑應具有良好清潔效果，不腐蝕材質， 殘留對無菌檢查無不利影響。清潔工具建議采用無塵材料，清潔方法、頻度及清 潔用設備和材料應予以規范。
（4）培訓與安全
操作人員在使用隔離系統進行無菌檢查前，應接受特定操作規程、日常維護 及安全相關知識的培訓，并經考核合格后上崗，按權限級別進行隔離系統的操作。 培訓內容及考核成績應記錄在個人培訓記錄中。
操作人員必須遵守化學滅菌劑貯存及使用的安全事項的規定，應在隔離系統 安裝地點的顯著位置張貼化學滅菌劑的材料安全數據表（MSDS）。隔離系統使 用前，需要對設備的安全性進行檢查并做好使用記錄；使用時還應注意電氣安全， 預防滅菌劑泄漏可能造成的電氣事故。計算機化系統控制的設備，應考慮記錄數 據的安全保存。
（5）維護和周期性回顧
應根據使用特點和供應商建議制定預防性的設備維護和耗材更換計劃，定期 檢查并根據使用情況及時更換，常用耗材包括手套、半身服、空氣過濾器、密封 墊圈、蠕動泵管、聚氯乙烯艙體等。
建議定期對隔離系統使用情況進行總結，內容可涵蓋無菌檢查結果回顧、環 境數據統計和趨勢分析、歷次故障/偏離情況的調查、硬件和軟件升級情況調查、 操作規程修訂回顧等。
無菌檢查結果的解釋
如果隔離系統處于良好的驗證和維護狀態，其系統的完整性經過確認，且內 部空間及表面已經過滅菌工藝處理，操作人員與無菌檢查環境沒有直接接觸，那 么在經過驗證且功能正常的隔離系統內進行無菌檢查，假陽性結果很低。盡管如 此，隔離系統也僅是個機械設備，操作人員仍需遵循無菌操作規范。當出現無菌 檢查試驗結果陽性時，應按照無菌檢查法（通則 1101）中結果判斷的要求進行 分析，并作出該試驗結果是否有效的判定。
